CAR-T细胞疗法的无菌保障

梅里埃工业微生物

导言：2012年，美国一位身患急性淋巴细胞性白血病的小女孩，在生命垂危之际接受了实验性CAR-T细胞疗法并成为全球第一例治愈的儿童患者。该病例的成功，创造了人类历史上的医学奇迹。

CAR-T细胞免疫疗法

即嵌合抗原受体T细胞免疫疗法

Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy

该疗法是一种出现了很多年但近些年才被规范化使用到临床中的新型细胞疗法。在急性白血病和非霍奇金淋巴瘤的治疗上有着显著的疗效，被认为是最有前景的肿瘤治疗方式之一。

正如所有的技术一样，CAR-T 技术也经历着一个漫长的演化过程，目前已经更迭了四代不同的结构，并逐渐走向成熟。

图片来源 Jessica Hartmann et al.

EMBO Molecular Medicine 2017

CAR-T细胞治疗产品的上市

#2017年8月和10月

美国FDA先后批准了两款CAR-T细胞治疗产品：诺华旗下的Kymriash和吉利德科学子公司Kite Pharma的Yescarta。一石激起千层浪，该爆炸性的新闻沸腾了整个生物制药界。

#  2020年至2021年

在全球疫情爆发期间，CAR-T细胞治疗产品逆势而上，仍在不断推出新产品包括吉利德的Tecartus，百时美施贵宝的Breyanzi和Abecma。

# 2021年6月

中国也迎来了首款获批上市的CAR-T细胞治疗产品：复星凯特的奕凯达^®(阿基仑赛注射液)，这一好消息也给挣扎于生死边缘的中国的癌症患者们带来了生的希望。(阿基仑赛注射液就是复星凯特于2017年初从Kite Pharma引进的Yescarta) 

细胞制品的管理办法

由于我国现行的法律法规中尚未对细胞治疗产品的属性和归口问题进行完善地界定，鉴于其药品应用属性，国家药品监督管理局(NMPA)于2017年12月发布的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》中依然要求按照《药品管理办法》来进行管控。

来源：中国国家药品监督管理局官网

2018年6月，中国食品药品检定研究院也发布了《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》，为指导我国免疫细胞治疗产品研发和质控，提供可参考的技术指导原则。

来源：知网-中国药事 2018年06期

细胞治疗制品的特殊性

现阶段的细胞制品，多为有限厂房空间制备的无菌工艺，稍有不慎便会受到细菌等微生物的污染。而作为直接注射到人体内的生物制品，必须保证放行的产品是无菌的。传统药品进行无菌检测通常有两种方法：薄膜过滤法和直接接种法，细胞制品的特殊性完全不适合薄膜过滤法，而直接接种法需要14天的检测时间，无法满足快速放行产品的需求。

CAUTION！

# 首先为了确保细胞制品的生物活性，我们不能对无菌工艺产品执行终端灭菌。

# 其次细胞制品的组成复杂，群体多样性以及细胞体积大，无法进行过滤。

# 最后细胞制品的样本量小、货架期只有几天时间，14天的传统无菌检测方法无法满足要求。

那我们该如何保障细胞制品的无菌并解决其短货架期与漫长检验周期之间的矛盾呢？

无菌检查法替代方法

美国药典USP<1223>、欧洲药典EP 5.1.6、日本药典EP 2.6.27和中国药典9201中都有相应的一个章节叫做“药品微生物检验替代指导原则”。中国药典中提到：“在控制药品微生物质量中，微生物试验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要采用非药典规定的检验方法(即替代方法)时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。”

而随着行业的进展，EP2.6.27和USP<1071>也应运而生，对细胞疗法产品和其所代表的短效期产品的质控提供了新的指南。很多新的技术得以进入，厂家可在临床试验前就做到充分调研，对产品放行检验时采用新兴和传统检验方法相互验证，待积累足够多的方法学验证与对比分析数据后，考虑替换新的快速放行方法。

快速微生物检测技术(RMM)

随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：

⑴ 基于微生物生长信息的检验技术。如生物发光技术、电化学技术、比浊法等。

⑵ 直接测定被测介质中的活微生物的检验技术。如固相细胞技术法、流式细胞计数法等。

⑶ 基于微生物细胞所含有的特定组成成分的分析技术。如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。

这些方法较传统检查方法更简便快速，并且具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。

核酸扩增是检测速度最快的方法，但是其费用昂贵，对人员操作的要求也很高。固相细胞计数法、流式细胞计数法的检测速度相对基于微生物生长的检测方法要更快，但该方法在细胞治疗行业尚未被验证。而基于微生物生长的检测方法操作最为简便，成本相对其他两种方法而言较低，检测原理也最贴近药典中的传统检测方法。因此，目前细胞制品行业普遍认可，使用最广泛的还是基于微生物生长的快速检测技术。

BACT/ALERT 3D

轻松进行无菌检测

生物梅里埃BACT/ALERT 3D Dual-T双温检测系统就是基于微生物生长的快速检测技术。

案例分享！

目前，诺华旗下的Kymriash以及吉利德科学子公司Kite Pharma的Yescarta产品都使用了BACT/ALERT 3D Dual-T双温检测系统。

该无菌快速检测方案大大加快了细胞治疗产品的放行速度，把检测时间从14天缩减到5-7天。同时，该仪器最大程度地符合药典要求，可以在20-25℃和30-35℃下进行培养。

生物梅里埃助力细胞治疗行业

随着我国首款CAR-T细胞治疗产品的上市，国内细胞疗法领域的商业化竞争逐渐拉开帷幕。据弗若斯特沙利文分析，中国CAR-T疗法的市场规模将由2021年的2亿人民币增长至53亿人民币，并于2030年增长到289亿人民币。CAR-T疗法的时代将要到来，未来可期。