生物治疗蛋白质是一类高度复杂的分子，通常使用重组方法通过发酵进行生产。然而，该生产过程中会产生许多这些蛋白质的不同异构体。要想保证此类药物的质量，必须先确保产品的正确生产、任何杂质的准确鉴定和定量，并且对蛋白质的效价进行测定。

如何准确测量治疗性蛋白的有效性与稳定性？工欲善其事必先利其器采用适宜的分析系统，对于获得可靠数据至关重要。Agilent 1290 Infinity II 生物液相色谱系统具备 1290 Infinity II 液相色谱仪的所有优势，并在此基础上增加生物兼容性流路，可实现生物制药中关键质量属性的高性能分析。系统提供了适应不断变化环境的灵活性，且易于从常规系统进行方法转移。别让千里之堤毁于蚁穴除了液相系统外，色谱柱的生物惰性也直接影响着数据准确性，因为色谱柱是影响流路中金属含量的最大因素。Agilent AdvanceBio 液相色谱柱经过精心设计和制造，能够在分析高度复杂的生物治疗分子以及监测它们的纯度、效价和其他关键质量属性时，为您提供可靠的结果，部分具有 PEEK 内衬。您的流路是否生物兼容？去除流路中的不锈钢可以提高回收率、改善峰形并提高灵敏度如图所示，不锈钢色谱柱硬件是克服回收率问题的最大阻碍（图 1中）。带 PEEK 内衬的色谱柱（图1上、下）可最大程度提高回收率和灵敏度，同时明显改善峰形。

图 1. 在安装带 PEEK 内衬的 AdvanceBio MS Spent Media色谱柱和不锈钢InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色谱柱的 1260 Infinity II 生物惰性液相色谱和 1260 Infinity II 液相色谱上，分析腺苷 (A)、AMP、ADP 和 ATP 得到的 HILIC-DAD 色谱图
具有 PEEK 内衬的不锈钢色谱柱，有效消除金属诱导干扰AdvanceBio SEC 1.9 μm 色谱柱，SEC/MS 应用的最佳选择这些带 PEEK 内衬的色谱柱可减少与不锈钢表面的相互作用，而这种相互作用可能导致额外的聚集。这些色谱柱具有 2.1 mm 的窄内径，运行流速仅为 0.05–0.10 mL/min，适用于灵敏的天然模式蛋白质分析。此外，它们的惰性亲水涂层使您可以使用浓度较低的挥发性流动相，同时尽量减少非特异性相互作用。因为大部分不锈钢色谱柱带有裸露的活性金属位点，所以需要用生物样品进行钝化，以获得可接受的重现性水平。带 PEEK 内衬的不锈钢色谱柱没有活性金属位点，可以减少色谱柱灌注需求，并能节省您的时间和样品。您还可以使用 AdvanceBio SEC 标准品检查这些色谱柱的质量，方法与 SEC 不锈钢色谱柱类似。图 2. 在 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 系统中，在变性条件下（使用甲酸作为离子对试剂）使用乙腈水溶液对肌红蛋白分子进行体积排阻色谱分析。在变性条件下，解卷积质量对应于脱辅基蛋白肌红蛋白，其中不再有血红素基团。而在天然模式下，解卷积质量对应于全肌红蛋白（血红素基团仍然完整），其中仅有少量脱辅基蛋白肌红蛋白。AdvanceBio PLRP-S 1000 Å 5 μm 色谱柱，用于完整蛋白质分析的优异惰性PLRP-S 填料是完整蛋白质分析的行业领导者。惰性 PLRP-S 1000 Å 聚苯乙烯-二乙烯基苯固定相的大孔径具有出色的传质性能，可确保出色的蛋白质回收率，且残留极少。其聚合物基座本身具有疏水性，可使用与质谱兼容的离子对试剂（如甲酸）进行反相分离。而且，不含残留硅醇基，可获得极佳的峰形。此外，色谱柱带 PEEK 内衬的硬件最大程度降低了由次级金属相互作用而产生干扰的风险，如氧化和峰拖尾。图 3. 对于整个分析，带 PEEK 内衬的不锈钢色谱柱可通过减少由次级金属相互作用导致的峰拖尾，同时保持相似的洗脱曲线和保留时间，来明显提高对称性。AdvanceBio 2.7 μm EC-C18 色谱柱，专为生物兼容性生物兼容性 (U)HPLC 仪器设计全封端 C18 硅胶固定相拥有出色的保留特性，适用于酶解的蛋白质中常见的各种肽。此外，它们的表面多孔 Poroshell 颗粒无需极高操作压力即可提供高性能。我们建议将 EC-C18 用于不锈钢色谱柱可能与组分（如磷酸化肽）相互作用的应用，或会增加不稳定氨基酸（如蛋氨酸）柱上氧化的应用。

好色谱柱，必配好接头

如果使用不合适的接头连接 Peek 内衬色谱柱，将会对柱头内 PEEK 内衬部件造成不可修复的损坏。

因此，我们推荐使用 UHP-FF fitting（Bio-inert，首推）、Quick Turn fitting（仅连接色谱柱端）或 Quick Connect fitting（需与热交换器组件配套使用），并配合 PK/ST 毛细管线。

为了得到最佳的实验结果，我们推荐整体的 Agilent InfinityLab Bio-inert Solution: PEEK 内衬的色谱柱搭配 InfinityLab Bio-inert LC System 和 Bio-inert Quick Connect column heat exchanger 共同使用。